mRNA合成过程所需原料及成本测算报告：酶（36页）

行业报告下载 2021年10月13日 08:52 管理员

RNA 疫苗生产可分为两大块，可以类比为“原料药”（mRNA）的生产和纯化，以及“制剂”（利用脂质微粒进行包封）阶段。原料药（mRNA）生产涉及 DNA 原液制备和 mRNA 原液的制备，mRNA 原液的制备（体外转录），是整个 mRNA 工艺流程中核心的步骤，而原料主要是酶。 (一) mRNA 疫苗的生产 mRNA 疫苗生产可分为两大块，原料药（mRNA）的生产以及制剂（利用脂质微粒进行包封）阶段。mRNA 生产涉及 DNA 原液制备和 mRNA 原液的制备。所以 mRNA 疫苗的生产可分为三大阶段，第一步 DNA 原液制备，第二步 mRNA 原液的制备，第三步是利用脂质微粒进行包封。第一步：DNA 模板生产，主要是质粒生产。编码抗原的 DNA 模板生产，常用大肠杆菌大规模体内表达，最后提取和纯化携带目的序列的质粒；第二步：mRNA 原液的制备，转录，由 DNA 到 mRNA。在无细胞的反应器内进行转录，通过 T7、SP6 或 T3 等 RNA 多聚酶作用，通过一步或者两步法转录成为 mRNA，同时加上 5’的 Cap 及 3’的 Poly A 尾巴，在进一步使用 DNA 酶将残留的 DNA 模板进行消除；纯化，使用离子交换等层析步骤进一步将转录形成的 mRNA 进行纯化，进行超滤浓缩形成原液；

第三步：制剂阶段，利用脂质微粒进行包封。通过微流体泵精确地控制着 mRNA 原液和脂质流速，将他们混合成脂质纳米粒 LNP。最后则是成品的灌装及质量控制，贴签形成终产品。利用优化的T7 RNA聚合酶介导的转录反应在体外合成了编码序列优化的mRNA，尿苷被 N1-甲基假尿苷完全取代。转录后，使用牛痘苗封盖酶（新英格兰生物实验室）和痘苗 2′O-甲基转移酶（新英格兰生物实验室）将 Cap 1 结构添加到 5’端。通过 oligo dT 亲和纯化纯化 mRNA，通过切向流过滤将缓冲液交换到 pH 为 5.0 的醋酸钠中，无菌过滤，并在-20°C 下冷冻，直到进一步使用。总结：转录采用两步法，需要加帽酶的参与，甲基假尿苷取代尿苷。 3）ARCoV -艾博生物该 mRNA 在体外使用 T7 RNA 聚合酶介导的转录从质粒 ABOP-028（GENEWIZ）的线性化 DNA 模板中产生，该质粒编码 SARS-CoV-2 的密码子优化 RBD 区域，并包含 5’和 3‘的未翻译区域（UTR）和一条 poly-a 尾巴，以未修饰的 NTP 作为原料和 T7 聚合酶体外进行 mRNA 的合成，使用了牛痘加帽系统（Vaccinia Capping System ） (Novoprotein) 进行加帽。