核酸检测行业报告：医疗产业创新（52页）

行业报告下载 2020年05月11日 07:04 管理员

在我国的体外诊断试剂（IVD）分类中，第三类产品下属分类第一项就是“与致病性病原体抗原、抗体以及核酸等检测相关的试剂”。核酸检测与抗体检测、抗原检测是病原体检测的 3 种主要方式。核酸检测主要是检测样本中的病原体核酸序列；抗原检测是直接对病原体的表面抗原进行检测；而抗体检测则是检查人体免疫系统是否生产出针对特定病原体的特异性抗体。由于病原体进入机体到机体产生特异性抗体需要一段时间(窗口期)，因此抗体检测时间往往滞后于核酸检测；抗原检测虽然速度较快，但灵敏度低于核酸检测，更容易出现漏检。病原体核酸检测使用 PCR 技术、核酸测序技术、分子杂交技术等核酸检测手段，对患者样品中的核酸进行检测和分析，从而判断患者的感染情况。病原体检测是目前临床上核酸检测应用最广的领域。除病原体检测外，核酸检测还被用于肿瘤基因检测、遗传病检测、产前筛查等多个领域。按照技术手段不同，核酸检测可以通过 PCR 技术、基因测序技术和分子杂交技术等实现。

PCR 技术（Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应）是目前最常用的 DNA 扩增手段，通过变性-退火-延伸三个基本反应步骤的不断循环，将目标片段以指数速度扩增。变性是通过升温将双链的 DNA 加热后解离为单链 DNA，以做为复制的模板；退火是将温度降至 55℃左右，使得引物与模板 DNA 单链之间的互补序列能够配对结合；延伸是在 DNA 聚合酶的最适温度下，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的 DNA 单链。每完成一个循环，样品中的目标序列就会被扩增一倍。因此在数个循环之后，目标片段的数量将呈现指数级增长。 PCR 主要包括终点 PCR、RT-PCR：qPCR、dPCR 等。

终点 PCR，或称常规 PCR：使用者只在 PCR 反应结束之后，才通过凝胶电泳、毛细管电泳等方法对产物进行检测。终点 PCR 本身不容易精确定量，因此，临床上少用于检测，常用于目标片段的快速扩增。凝胶电泳：利用不同大小和构型的 DNA 分子在电场中的移动速度不同，对不同大小的特定 DNA 片段进行分离。毛细管电泳：是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术，应用此技术可以实现微量 DNA 片段的分离。 RT-PCR（reverse trascription-PCR，反转录 PCR）：RT-PCR 是将 RNA 的反转录（RT）与 PCR 相结合的技术。RNA 首先通过反转录酶的作用，合成互补序列的单链 cDNA，再通过 PCR 的方式，将单链 DNA 扩增成双链的 cDNA。由于 RNA 酶的广泛存在和单链 RNA 自身结构的不稳定性，通常通过 RT-PCR 先将 RNA 反转录成相应的 cDNA 再进行后续的检测工作。RT-PCR 目前广泛应用于针对 RNA 病毒的核酸检测过程中。 qPCR（Real-time quantitative PCR,实时荧光定量 PCR）：qPCR 通过在反应中添加插入性染料或荧光探针，实时监控 PCR 过程中的荧光强度，根据反应体系达到特定荧光强度循环数的不同，比较不同样品之间的拷贝数水平，达到定量的目的。与使用标准品制作的标准曲线进行比对，还可以对样品进行精确定量。qPCR 具有很高的敏感性和特异性，也是目前临床上最常用的 PCR 技术。